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二抗正確選擇和使用
更新時(shí)間:2010-08-30   點(diǎn)擊次數(shù):4979次

1. 種屬來(lái)源要匹配:根據(jù)所用一抗選定二抗。一般來(lái)說(shuō),如果一抗是小鼠原性,二抗應(yīng)選擇兔/山羊或其它種屬抗小鼠的抗體。目前,美國(guó)Vector公司和Zymed公司都有開發(fā)的用小鼠抗體檢測(cè)小鼠組織的試劑盒,即一抗來(lái)源于小鼠,該試劑盒采用了通用非特異性封閉液和封閉內(nèi)源性小鼠Ig的封閉液,可以得到清晰的染色背景。

2. 注意抗體同種型和亞型:確定一抗同種型和亞型后,可以選擇抗一抗來(lái)源種屬?gòu)V譜Ig或針對(duì)一抗亞型的二抗。如一抗是小鼠IgG1, 可以選用山羊抗小鼠的IgIgG1的二抗。

3. 正確使用:也需要重新選擇稀釋比例。一般從供應(yīng)商提供稀釋比例的1/10稀釋度始,作5倍比稀釋。

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